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择要：方针制备百合地黄汤物资基准，施行制备流程工艺和原料操纵剖析，评估其科学性和正当性。法子按古籍法子制备15批物资基准，测定制备流程中梓醇和毛蕊花糖苷的含量，打算变化率和出膏率；竖立HPLC指纹图谱探测法子，别离探测饮片、煎煮液、浓缩液和物资基准的指纹图谱，施行共管色谱峰归属、指认和彷佛度评估。后果15批物资基准梓醇和毛蕊花糖苷变化率别离为81.40%～92.88%和28.90%～41.41%，出膏率为36.06%～41.71%，均未呈现分散数据；煎煮、浓缩和冻干流程有用成份变化率较稳固。标定物资基准指纹图谱共管峰16个，个中6个归属于百合、9个归属于地黄，指认了3个色谱峰；饮片、煎煮液、浓缩液和物资基准指纹图谱彷佛度均大于0.9；煎煮液、浓缩液、物资基准3者对比图谱的彷佛度均大于0.99。论断该指纹图谱探测法子正当可行，能同时实用于饮片、中心体和物资基准；物资基准制备工艺科学正当，不会形成其物资根基显然改革。本尝试为百合地黄汤制剂开辟奠基了根基，为典范名方物资基准制备流程工艺与原料评估供应了新思绪。

百合地黄汤（BaiheDihuangDecoction，BDD）出自东汉?张仲景所著的《金匮要略?百合狐惑阴阳毒病脉证治》，全方2味，君以百合，养阴润肺、清心安神，佐以地黄清热凉血、养阴、生津，两药实用，共奏养阴清热、补益心肺之成果，主治百合病之心肺阴虚内热症，是医治百合病的典范药方[1-3]。百合病病证与当代神经精力系统类疾病病征宛如，首要体现为精力恍忽、神态未必、舌赤、尿黄等病症，目前临床上罕用BDD及其加减方来医治各类典型的忧郁症，疗效显著、平安性高[4-7]，其抗忧郁的机制大概与按捺单胺氧化酶活性、调整HPA轴成效杂乱等关联[8-9]。

典范名方有着久长、丰裕的用药史乘，BDD做为一首典范名方，当前仍有较好的临床价钱。为了更好地传承并改革开辟典范名方药物，年5月，国度方剂监视经管局公布了《古代典范名方中药复方制剂简化备案审批经管规章》，提议了“物资基准”，是指掂量制剂与中医临床所哄骗的药用物资是不是一致的中药药用物资准则[10]，典范名方复方制剂的悉数药学协商均须与物资基准施行比较，以保证与物资基准的关键原料属性一致。是以，BDD物资基准制备流程的科学性与正当性评估，是BDD制剂开辟的中心和难点。本尝试采取道地产区的15批百合和地黄饮片，随机组合，以古籍记录的煎煮法子为根据施行物资基准的煎煮-浓缩-枯燥工艺协商，同时，竖立指纹图谱探测法子，并连系有用成份变化率、出膏率等技能目标，对工艺全流程施行原料评估剖析，以期为BDD制剂的开辟奠基根基。

1仪器与材料

1.1仪器

Waterse高效液相色谱仪，美国Waters公司；Agilent高效液相色谱仪，美国安捷伦公司；XSDU型电子剖析天平（精湛度0.01mg/0.1mg）、XS型电子剖析天平（精湛度0.1mg），瑞士MettlerToledo公司；LYO-1型冷冻枯燥机，上海东富龙科技有限公司；PCDX-JB-10型超纯水机，成都品成科技有限公司。

1.2试药

乙腈为色谱纯，美国Fisher公司；水为超纯水，克己；其余试剂均为剖析纯。对比品毛蕊花糖苷（批号-，原料分数92.5%）、梓醇（批号-，原料分数99.6%）均购自华夏食物方剂检定协商院；对比品异毛蕊花糖苷（批号PCL-#-Ve，原料分数99.47%）、地黄苷（PCL-#-Ma，原料分数98.0%）均购自英国PureChemLand公司。

15批百合和地黄2味药材购自3个不同产地，经四川省方剂格量协商所主任药师黎跃成审定，别离为百合科植物百合LiliumbrowniiF.E.Brownvar.viridulumBaker的枯燥肉质鳞叶和玄参科植物地黄RehmanniaglutinosaLibosch.的新鲜或枯燥块根。药材经炮制得15批百合饮片和地黄饮片，详细消息见表1，经搜检，药材和饮片的水份、浸出物、含量等均契合《华夏药典》年版关联规章[11]。

2法子与后果

2.1饮片的含量测定

按《华夏药典》年版一部“地黄”项下含量测定法子，测定地黄饮片中梓醇和毛蕊花糖苷的含量，后果见表2。

2.2BDD物资基准的制备[12-14]

称取百合饮片30g于烧杯中，加水mL，浸泡30min，置电炉上加热至沸后维持微沸50min，煎煮至约mL，滤过，得百合煎液。称取地黄饮片30g于烧杯中，加9倍量水，浸泡30min，置电炉上加热至沸后维持微沸20min，滤过；残渣加7倍量水，加热至沸后维持微沸15min，滤过，兼并2次滤液约mL，得地黄煎液。兼并上述2种煎液，合煎至mL，得BDD煎煮液。取煎煮液mL减压浓缩至约40g，定容至50mL，得浓缩液，冷冻枯燥，即得BDD物资基准。

2.3物资基准制备流程中有用成份的含量及出膏率的测定

2.3.1梓醇的含量测定

（1）色谱前提：采取Agilent高效液相色谱仪，UltimateLP-C18（mm×4.6mm，5μm）色谱柱；以乙腈-0.1%磷酸水溶液（1∶99）为崎岖相；进样量10μL；探测波长nm；柱温30℃；理论板数按梓醇峰打算不低于。

（2）对比品溶液的制备：取梓醇对比品适当，精湛称定，加崎岖相制成含梓醇μg/mL的溶液，即得。

（3）供试品溶液的制备：①煎煮液：精湛量取BDD煎煮液1mL置10mL量瓶中，加崎岖相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。②浓缩液：精湛量取BDD浓缩液1mL置50mL量瓶中，加崎岖相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。③物资基准：取BDD物资基准约0.7g，精湛称定，置mL量瓶中，加崎岖相80mL超声解决（功率W，频次40kHz）10min使消融，掏出，放冷，定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

（4）法子学侦查：对该法子施行法子学侦查，后果讲明该法子精湛度、反复性和稳固性优越；以梓醇峰面积（Y）对证量浓度（X）施行线性回归，得线性回归方程Y＝2.X＋11.，r＝0.，梓醇在7.93～.71μg/mL线性关联优越，梓醇的加样回收率在96.8%～.5%，RSD为2.3%，该法子精确度优越。

（5）样本测定：对供试品溶液施行梓醇含量测定，打算变化率（变化率＝样本中梓醇量/饮片中梓醇量），后果见表2、3。

2.3.2毛蕊花糖苷的含量测定

（1）色谱前提：采取Waterse高效液相色谱仪，XSelectHSST3（mm×4.6mm，5μm）色谱柱；以乙腈-0.1%醋酸水溶液（16∶84）为崎岖相；进样量20μL；探测波长nm；柱温30℃；理论板数按毛蕊花糖苷峰打算不低于。

（2）对比品溶液的制备：取毛蕊花糖苷对比品适当，精湛称定，加崎岖相制成含毛蕊花糖苷10μg/mL的溶液，即得。

（3）供试品溶液的制备：①煎煮液：精湛量取BDD煎煮液2mL置10mL量瓶中，加崎岖相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。②浓缩液：精湛量取BDD浓缩液1mL置25mL量瓶中，加崎岖相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。③物资基准：取BDD物资基准约0.7g，精湛称定，置50mL量瓶中，加崎岖相35mL超声解决（功率W，频次40kHz）10min使消融，掏出，放冷，定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

（4）法子学侦查：对该法子施行法子学侦查，后果讲明该法子精湛度、反复性和稳固性优越；以毛蕊花糖苷峰面积（Y）对证量浓度（X）施行线性回归，得线性回归方程Y＝36.X－9.，r＝1.，毛蕊花糖苷在1.53～.03μg/mL线性关联优越，毛蕊花糖苷的加样回收率在97.9%～.0%，RSD为1.8%，该法子精确度优越。

（5）样本测定：对供试品溶液施行毛蕊花糖苷含量测定，打算变化率（变化率＝样本中毛蕊花糖苷量/饮片中毛蕊花糖苷量），后果见表2、3。

2.3.3出膏率的测定测定15批物资基准的出膏率（出膏率＝物资基准干膏原料/饮片投料量），后果见表3。

后果显示，地黄饮片梓醇和毛蕊花糖苷平衡含量别离为1.77%和0.%，RSD别离为5.64%和7.52%，表明道地产区不同产地药材炮制所得地黄饮片有用成份含量无显然差别。

煎煮液、浓缩液和物资基准中，梓醇平衡变化率别离为88.57%、87.79%和87.20%，RSD别离为5.71%、4.47%和3.35%；毛蕊花糖苷平衡变化率别离为35.15%、34.57%和34.26%，RSD别离为12.37%、11.69%和11.39%。因讨取溶媒为水，梓醇极性较强而变化率较高，毛蕊花糖苷极性偏弱而变化率偏低；琢磨地黄饮片中毛蕊花糖苷含量较低，其变化率摇动可根基采用，表明煎煮、浓缩和冻干工艺较稳固，未形成有用成份的显然损失。

15批物资基准梓醇和毛蕊花糖苷平衡原料分数别离为2.15%、0.%，RSD别离为4.90%、8.31%，平衡出膏率为38.39%，RSD为4.18%，未呈现分散数据（均值的70%～%除外）[15]，表明该制备工艺较正当，未形成显然的批间差别。

2.4HPLC指纹图谱剖析

2.4.1供试品溶液的制备

（1）饮片供试品溶液：别离取百合煎液、地黄煎液，加水定容至mL，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

（2）煎煮液：取BDD煎煮液，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

（3）浓缩液：精湛量取浓缩液2mL，置10mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

（4）物资基准：取枯燥粉末0.7g，至10mL量瓶中，加水使消融，定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4.2混杂对比品溶液的制备别离取毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、地黄苷对比品适当，精湛称定，加崎岖相制成份别含毛蕊花糖苷16μg/mL、异毛蕊花糖苷35μg/mL、地黄苷4μg/mL的混杂对比品溶液，即得。

2.4.3色谱前提及系统适应性实验色谱柱为WatersSymmetryC18柱（mm×4.6mm，5μm）；崎岖相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱：0～10min，5%～11%乙腈；10～25min，11%～12%乙腈；25～37min，12%乙腈；37～44min，12%～16%乙腈；44～50min，16%～18%乙腈；50～53min，18%～22%乙腈；53～58min，22%～24%乙腈；58～65min，24%～36%乙腈；65～68min，36%～42%乙腈；探测波长nm；体积流量1.0mL/min；柱温30℃；进样量30μL。精湛汲取空白溶液、混杂对比品溶液和物资基准供试品溶液各30μL，注入液相色谱仪，测定，纪录色谱图，后果见图1。

2.4.4精湛度侦查取统一物资基准供试品溶液（批号BDDWZJZ），按“2.4.3”项下色谱前提，陆续进样6次，纪录色谱图。以异毛蕊花糖苷色谱峰为参照峰，打算各共管峰相对保存功夫的RSD＜0.43%，相对峰面积的RSD＜1.83%，讲明仪器精湛度优越[13]。

2.4.5稳固性侦查取统一物资基准供试品溶液（批号BDDWZJZ），按“2.4.3”项下色谱前提，别离在0、2、4、8、12、24h时进样测定，纪录色谱图。以异毛蕊花糖苷色谱峰为参照峰，打算各共管峰相对保存功夫的RSD＜1.11%，相对峰面积的RSD＜4.43%，讲明供试品溶液在室温下24h内稳固性优越。

2.4.6反复性侦查平行制备6份物资基准供试品（批号BDDWZJZ），按“2.4.3”项下色谱前提测定，纪录色谱图。以异毛蕊花糖苷色谱峰为参照峰，打算各共管峰相对保存功夫的RSD＜0.61%，相对峰面积的RSD＜4.58%，讲明该法子反复性优越。

2.4.7样本探测与剖析取15批百合饮片、地黄饮片、BDD煎煮液、浓缩液和物资基准，按“2.4.1”项下法子制备供试品溶液，按“2.4.3”项下色谱前提别离测定，纪录色谱图。将样本色谱图导入中药指纹图谱彷佛度评估系统软件（国度药典委员会，A）中，采取平衡数法，功夫窗为0.1min，施行色谱峰般配及彷佛度剖析，后果见图2和表4、5。

后果显示，15批物资基准指纹图谱中，觉察16个共管峰，个中6个色谱峰（4～6、9、10、12号峰）归属于百合饮片，占百合饮片总峰面积85.11%，

占物资基准总峰面积52.44%；9个色谱峰（2、3、7、8、11、13～16号峰）归属于地黄饮片，占地黄饮片总峰面积74.03%，占物资基准总峰面积37.67%，并确认11、13和15号色谱峰别离为毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷和地黄苷。讲明，BDD物资基准的首要物资群都可明晰地回首到饮片，归属明白。采用离开度较好的异毛蕊花糖苷色谱峰做为参照峰，打算各共管峰的相对保存功夫RSD＜0.42%，相对峰面积RSD为15.29%～70.41%。

15批百合饮片、地黄饮片、煎煮液、浓缩液和物资基准指纹图谱与各自的对比指纹图谱彷佛度均＞0.9。讲明不同产地不同批次饮片的首要物资群差别较小；煎煮液、浓缩液和物资基准各自的物资群较稳固，表明煎煮、浓缩和枯燥工艺较科学、正当。煎煮液、浓缩液、物资基准3者对比图谱的彷佛度均＞0.99，各共管峰相对保存功夫根基一致，相对峰面积无显然变动。看来在物资基准制备流程中，首要物资群从饮片-煎煮液-浓缩液-物资基准能逐级完好通报，且浓缩和枯燥工艺未形成首要物资群峰面积显然丧失，表明物资基准制备流程总体工艺较科学、正当。

3议论

3.1物资基准制备工艺正当性

《金匮要略》中BDD的原方为“百合（七枚，擘）、生地黄汁（一升）；右以水洗百合，渍一宿，当白沫出，出其水，更以泉水二升，煎取一升，去滓，本地黄汁，煎取一升五合，分温再服。”经验证，方中“一升”约为当代mL，“五合”约为当代mL[16]。方中生地黄汁为鲜地黄蒸炙后绞汁[17]，由于其炮制法子繁杂，且当代临床少用，课题组前期协商觉察鲜地黄汁与生地黄煎液物资根基根基一致，故以生地黄煎液替换鲜地黄汁入药。方中百合、生地黄用量由古籍验证连系当代中医临床哄骗景况，并经大师共鸣后得出。

本尝试在BDD物资基准的制备工艺协商中，一直以古籍记录的煎煮法子为根据，以饮片-煎煮液-浓缩液-物资基准中首要物资群的量值通报关联为焦点[18]，以有用成份变化率、出膏率等技能经济目标为撑持，开展制备流程的工艺和原料操纵协商，以保证制备工艺的科学性和物资基准的批间原料一致性及可回首性。

3.2目标成份的筛选

协商觉察，BDD中含有百合皂苷、岷江百合苷D、谷氨酸、腺苷、多糖等多种活性成份[19-20]，百合中活性成份首要为甾体皂苷和多糖类，地黄中活性成份为梓醇、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、多糖等[21-23]。本尝试以梓醇和毛蕊花糖苷为目标成份，可将物资基准的原料操纵与活性相干。尝试后期将采取紫外-看来分光光度法对物资基准中百合皂苷及总多糖施行原料操纵协商，以更通盘地操纵BDD物资基准的原料。

3.3指纹图谱前提侦查

尝试中较量不同临盆厂家（Waters、Shimadzu、Agilent）色谱柱的离开成绩，对崎岖相、柱温、体积流量等色谱前提施行了一再侦查，按照色谱峰的数目、峰形及离开度，终究以乙腈-0.1%磷酸水溶液为崎岖相施行梯度洗脱。采取二极管阵列探测器（DAD探测器）对物资基准供试品溶液施行全波长扫描，剖析三维图谱，较量、、、、nm波长下的色谱图，后果在nm时，色谱峰较多，且反映值较高，故以nm做为探测波长。

3.4指纹图谱彷佛度评估剖析

15批物资基准指纹图谱中，共管峰相对峰面积变动较大，主如果3个产地的百合饮片含量差别较大，百合饮片总峰面积为隆回县＞武冈市＞万载县。是以，在典范名方及其余中药新药的研发中，首先应操纵原药材原料的均一性，若药材因产地不同而原料差别较大时，可静止产地或操纵药材的含量限度局限，而且在临盆中可筛选饮片均化投料的法子，以操纵中成药原料的均一性和稳固性，进而保证其临床疗效的稳妥表现。

3.5运用

本尝试竖立了同时恰当于BDD饮片、中心体及物资基准的指纹图谱探测法子，该法子正当可行、反复性好，能较通盘地展现饮片和物资基准中的首要物资群。物资基准制备工艺总体较科学、正当，流程工艺不会形成其物资根基的显然改革，制得的物资基准原料稳固、批间差别小，为BDD复方制剂的开辟及一致性评估奠基了根基，也为典范名方物资基准制备流程工艺与原料评估供应了新思绪。

参考文件（略）

起因：周菲，林美斯，王琳，李锐，张春容，赵丽，林大捷，曹科.典范名方百合地黄汤物资基准制备及流程原料操纵协商[J].中草药,,50(16):-.