发表在中华肾脏病杂志上的研究，医院儿科儿科遗传性疾病分子诊断与研究北京市重点实验室的丁洁、丁方睿教授联合中国中医科学院中药研究所边宝林、司南教授，关于《毛蕊花糖苷对嘌呤霉素肾病及足细胞损伤》模型的疗效研究。结果：毛蕊花糖苷可有效地降低嘌呤霉素大鼠蛋白尿水平，恢复足细胞损伤标志物nephrin、synaptopodin的蛋白表达，缓解足细胞足突融合；体外研究中，毛蕊花糖苷可以有效恢复足细胞活力，降低足细胞受损后增强的迁移能力，保护足细胞细胞骨架，恢复nephrin蛋白表达。

结论：本研究证实毛蕊花糖苷可以通过保护足细胞降低嘌呤霉素诱导肾病大鼠蛋白尿及缓解嘌呤霉素诱导足细胞损伤，丰富了对地黄叶总苷胶囊降低蛋白尿作用的认识。

蛋白尿是慢性肾脏病的主要临床症状之一，也是此类疾病进展至终末期肾脏疾病的独立危险因素。近年的研究证实降低蛋白尿可以延缓慢性肾脏疾病的进展，因此寻找和研发治疗蛋白尿的靶点及药物是目前肾脏领域研究的重点和热点。地黄叶总苷胶囊是我国近年新开发的一种治疗蛋白尿的药物，其Ⅰ～Ⅳ期临床试验证实该药物在治疗慢性肾脏病中可以安全有效地降低蛋白尿。尽管如此，这一药物如何降低蛋白尿的确切分子机制并不十分清楚。在蛋白尿的发生机制中，越来越多的研究证实足细胞损伤是导致蛋白尿发生的核心因素。足细胞结构和功能的异常会导致肾小球滤过屏障结构和功能障碍，进而导致血液中的大分子蛋白进入尿液，最终引起蛋白尿的发生。因此，明确某一药物在治疗蛋白尿中的作用机制，需首先探讨该药物对足细胞的作用情况。

该实验研究通过建立嘌呤霉素大鼠肾病模型，检测尿蛋白、足细胞损伤标志物和电镜下观察足突融合状态探讨毛蕊花糖苷对蛋白尿治疗和对足细胞保护的作用；通过体外建立嘌呤霉素诱导足细胞损伤模型，进行足细胞活力实验、迁移实验、足细胞细胞骨架检测，以及足细胞损伤标志物nephrin检测，探讨毛蕊花糖苷对足细胞保护效应。

选用2只同一批次雄性大鼠（6周）进行饲养，在适应环境3d后随机分为3组：（）正常对照组，（2）嘌呤霉素组，（3）嘌呤霉素+毛蕊花糖苷组。其中2、3组在实验第0天予嘌呤霉素5mg/00g单次腹腔注射，正常对照组予同等剂量的生理盐水腹腔注射。嘌呤霉素+毛蕊花糖组每天予0mg/kg毛蕊花糖苷灌胃处理，正常对照组和嘌呤霉素组每天予同等剂量注射用水灌胃处理。

嘌呤霉素大鼠24h尿蛋白在5d开始高于正常对照组，0d达到峰值，之后开始慢慢下降，至20d时，尿蛋白下降，但是仍然高于正常对照组。与嘌呤霉素组相比，嘌呤霉素+毛蕊花糖苷组大鼠5d时24h尿蛋白没有差异，0d、5d及20d时24h尿蛋白均降低，提示毛蕊花糖苷能够缓解嘌呤霉素肾病大鼠尿蛋白的异常升高。

嘌呤霉素诱导肾病模型20d，嘌呤霉素组足细胞有部分足突融合，提示足突异常；在嘌呤霉素+毛蕊花糖苷组中，足细胞足突恢复明显，偶有融合，提示毛蕊花糖苷能够恢复足细胞足突融合情况。足细胞损伤的标志物synaptopodin、nephrin的变化：synaptopodin表达少，嘌呤霉素+毛蕊花糖苷组，荧光强度恢复，提示毛蕊花糖苷可以通过上调synaptopodin表达保护足细胞。

毛蕊花糖苷对嘌呤霉素大鼠足细胞足突融合的修复作用（电镜）

注：A：大鼠肾小球synaptopodin免疫荧光染色（×）；B：大鼠肾组织nephrinmRNA水平（实时定量PCR）；C：大鼠肾组织nephrin蛋白表达（Western印迹）；D：图C定量分析；：正常对照组；2：嘌呤霉素组；3：嘌呤霉素+毛蕊花糖苷组；

毛蕊花糖苷对嘌呤霉素大鼠足细胞损伤标志物的修复作用

为了进一步证实毛蕊花糖苷对足细胞的保护作用，本研究使用嘌呤霉素诱导足细胞损伤的细胞体外模型进行验证。首先，本研究中建立了嘌呤霉素诱导足细胞损伤模型。细胞活力实验MTS检测到当嘌呤霉素处理足细胞时，足细胞活力下降。而在嘌呤霉素诱导足细胞损伤时使用毛蕊花糖苷，足细胞活力恢复，提示毛蕊花糖苷可以恢复足细胞活力。足细胞的迁移实验也用来验证毛蕊花糖苷能够保护足细胞，与正常对照组比较，嘌呤霉素处理足细胞后，细胞迁移所占面积增加，提示足细胞受损；使用毛蕊花糖苷处理后，足细胞迁移能力恢复。除此之外，足细胞损伤的蛋白标志物nephrin，在毛蕊花糖苷处理后表达上调。足细胞受到嘌呤霉素处理后足细胞骨架呈短棒状无序排列，而使用毛蕊花糖苷后，足细胞中细胞骨架排列趋于整齐。以上的研究提示，毛蕊花糖苷可以保护足细胞免于嘌呤霉素诱导的损伤。

地黄叶总苷胶囊主要成分毛蕊花糖苷可以恢复足细胞损伤的指标并通过恢复足细胞活力，降低足细胞迁移能力，稳定足细胞骨架，恢复nephrin异常低表达从而保护足细胞。本研究证实：毛蕊花糖苷能够通过保护足细胞进而降低蛋白尿，丰富了地黄叶总苷胶囊降低蛋白尿作用的认识。