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具中科博生研究表明，角膜缘干细胞存在于角膜缘上皮基底层，此处的基底层细胞并非都是干细胞。

所谓表皮增生单位(epidermalproliferateunit,EPU),是由10～15层细胞构成，只有基底细胞能够增殖，而在一个EPU中有10～11个基底细胞，中间的一个是干细胞，其余的相当于短暂扩充细胞（transientamplifyingcel,TAC）。在对干细胞进行研究之前，需先采用特殊方法获得纯的干细胞，然后通过培养扩增细胞的数量用于以后的研究。对于干细胞的分离纯化方法已有不少尝试。中科博生。

Tseng等观察到，鼠在系统应用5-氟脲喀啶(5-FU）后骨髓细胞明显减少，而原始造血干细胞增多（TsengandZhang)。这提示5-FU可减少快速增殖TAC,而保留静止状态的干细胞。因角膜上皮可快速自我更新，并对5-FU毒性特别敏感，5-FU毒性选择作用于基底增殖细胞，可导致全部基底层以上细胞层的丧失，而是慢周期干细胞得以保留。据此，Tseng在兔结膜下注射5-FU

20mg/眼，可选择性减少角膜TAC,有效获得丰富的较纯的干细胞。中科博生。

Kruse等研究表明，将整个角膜上皮及周围3mm范围的角膜缘和结膜上皮取下后，用n-庚醇液环形擦拭，随处理时间不同，残留的细胞量不同，而角膜结膜上皮均被去除（Kruseetal.)。可见，用此方法能获得较纯的干细胞。中科博生。

Kruse等通过消化方法以获得单个的干细胞而进行培养（KruseandTseng)。在距离巩膜缘后2mm处剪下兔眼角巩膜片，去除内皮和虹膜。用10mm环钻取下角膜缘组织，用DispaseⅡ液消化10min,去除松散的上皮层，在通过0.1%胰蛋白酶和0.02%EDTA在无钙镁离子的EM中二次消化10min,即可将细胞分离为单个。中科博生。

另外，也有人利用毛地黄皂苷选择性地去除浅层角膜上皮，暴露基底细胞层（Yamadaetal.）。

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